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常見問題

  • CCK-8試劑(細胞計數工具)使用上常見問題
  •     CCK-8試劑是現行最方便、檢測速度最快、最靈敏的細胞計數工具。它在使用上非常簡單,以96wells細胞培養盤來說,一個well大約養100uL細胞懸浮液,加入要測定的藥劑,大約養24~48小時(視不同實驗需求調整),加入10uLCCK-8,養1~4小時即可測定結果CCK-8試劑中含有WST-8,可以被細胞內的脫氫酶(dehydrogenase)還原成橘黃色的WST-8 formazan,測量OD450nm的吸光值,即可測量well中細胞的數量。

        底下是CCK-8在實務上常見的問題,在此整理給大家:


    1. 如可設定空白對照組?
    A: 在不含細胞的培養基中,加入CCK-8, 測定450nm的吸光度做對照組。在細胞毒性試驗中,還要考慮藥物的吸收,所以還會在培養基中加入藥物,再測定450nm的吸光度。

    2. 哪些物質會影響CCK-8的測定?
    A: 當有還原劑存在時,會增加OD值;相反的,在有氧化劑存在時,會降低OD值。除此之外,大部份的養細胞藥品都不會影響CCK-8的測定。另外,在有酚紅存在時,會增加空白吸收,但這不影響實驗測定,只要使用對照組,扣掉空白吸收即可。

    3. 如果沒有450nm的濾光片,可以用其他的濾光片嗎?
    A: 還可以使用430nm~490nm之間的濾光片,但450nm濾光片的靈敏度最高。

    4. 可以使用CCK-8對細胞染色嗎?
    A: 不能。因為CCK-8的主要成份是水溶性的WST-8, 它是通過electron mediator(1-methoxy PMS)將活細胞中的電子交換到培養基中。因為WST-8及生成的WST-8 forzan是高度水溶性的,不會進入細胞中,所以無法使用CCK-8對細胞染色。

    5. CCK-8對於貼壁和懸浮細胞的靈敏度一樣嗎?
    A: 不一樣。懸浮細胞相較於貼壁細胞較難呈色。一般加入CCK-8 1~4小時後吸光值已經很高了,但對於懸浮細胞的培養基可能較低,這時候可以通過延長CCK-8染色時間來解決這個問題。

    6. 每次都要做標準曲線嗎?
    A: 建議每次都做。雖然CCK-8很靈敏,實驗數據效果也很穩定,但每種細胞的型態、形狀略有不同,所以還是建議每次都要做標準曲線。

    7. 有時在藥物作用下,細胞已經死亡,但去氫酶的活性還在,是否會影響檢結果?
    A: 會。因為CCK-8主要是靠著去氫酶的活性來呈色的,所以只要去氫酶的活性還在都會造成CCK-8呈色。建議再放置一陣子,等死細胞的去氫酶失去活性了,再進行檢測。

    8. 如果加入的藥物中有重金屬,是否會影響結果?
    A: 重金屬會影響CCK-8的檢驗效果。當藥物中最終濃度含有1mM氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅,分別會抑制5%、15%、90%的顯色反應,使得敏度感度下降。

    9. CCK-8可以用來檢測細菌細胞嗎?
    A: 可以檢測大腸桿菌,但不能檢測酵母菌。檢測大腸桿菌也是在每孔100uL的培養基中加入10uL的CCK-8,培養1~4小時測定。

    10. CCK-8的穩定如何?
    A: CCK-8在4℃可以保存一年。在-20℃中,可以穩定保持兩年。

    更詳細的CCK-8介紹及優惠資訊,請見底下網頁:
    http://www.cyrusbio.com.tw/webc/html/news/show.php?num=59&kind=1